METODO ANALITICO PARA LA MEDIDA DE LA ACTIVIDAD K-CASEINOLITICA DE ENZIMAS

Abstract

Método analítico para la medida de la actividad k-caseinolítica de enzimas de interés en la industria quesera y en la investigación biológica. Se basa en la medición de la cantidad de k-caseína degradada, marcada con el fluorocromo isotiocianato de fluoresceína. El método comprende las siguientes etapas: 1) Elaboración del sustrato, FTC-k-caseína, por unión de isotiocianato de fluoresceína a k-caseína. 2) Incubación de una muestra enzimática en presencia de FTC-k-caseína con el tampón adecuado para la enzima. 3) La reacción se detiene por adición de tricloroacético (TCA). 4) La fluorescencia emitida se obtiene midiendo una alícuota del producto de la reacción empleando un fluorímetro. 5) Los valores de actividad se extraen a partir de la ecuación de una recta patrón que relaciona la fluorescencia con la cantidad de k-caseína degradada.