Caracterización ontogénica y funcional del sistema inmunitario de la dorada

Resumo

Durante el desarrollo de la presente Tesis Doctoral se ha estudiado la inmunidad innata celular de la dorada (Sparus aurata, L.) así como el desarrollo de su sistema inmunitario. Para ello, se han abordado los siguientes aspectos científicos: (i) la caracterización de los macrófagos y de las células productoras de interleuquina -1 (IL-1b) en ejemplares sanos e infectados experimentalmente con la bacteria patógena Vibrio anguillarum, (ii) la caracterización morfológica, funcional y evolutiva de los mastocitos de dorada, (iii) el análisis de la presencia de péptidos antimicrobianos, piscidinas, en células del sistema inmunitario de la dorada y de otras especies de teleósteos, (iv) el estudio microscópico de los órganos linfomieloides (riñón, bazo y timo), la aparición y distribución de los granulocitos acidófilos, principales células fagocíticas de esta especie, y la expresión de genes marcadores de la inmunidad innata y adaptativa durante el desarrollo larvario y (v) por último, determinar la resistencia natural de larvas y juveniles de dorada frente al patógeno bacteriano Photobacterium damselae subsp. piscicida y la protección inducida por la vacunación frente a este patógeno.%&/En una primera etapa comprobamos que los macrófagos de dorada no se movilizan al foco inflamatorio y que los granulocitos acidófilos son los principales productores de IL-1b tras una infección experimental. Así mismo, hemos demostrado que los mastocitos de dorada son células acidófilas, no metacromáticas que contienen histamina y carecen de serotonina. La histamina es biológicamente activa en dorada y regula la activación de los fagocitos y la respuesta inflamatoria mediante la activación de los receptores H1 y H2. Además, la histamina sólo está presente en los mastocitos de peces del orden Perciformes y está ausente en anfibios y peces pulmonados. Estos resultados indican que aunque el almacenamiento de histamina en los mastocitos se estableció en el Triásico en los reptiles primitivos (Lepidosauria), este mismo acontecimiento parece haberse producido de forma independiente en los peces Perciformes en una época mucho más reciente, a principios del Eoceno. Por otra parte, hemos comprobado que las piscidinas se localizan en mastocitos y granulocitos acidófilos de dorada y participan en la muerte y destrucción de los patógenos que han sido fagocitados. Estos péptidos antimicrobianos sólo están presentes en los gránulos citoplasmáticos de los mastocitos de peces del orden Perciformes.%&/En una segunda etapa caracterizamos el sistema inmunitario de larvas y juveniles de dorada. En primer lugar, encontramos que la secuencia de aparición de los órganos linfomieloides del sistema inmunitario de dorada es similar a la encontrada en otros peces marinos: riñón cefálico, bazo y timo y que los granulocitos acidófilos se observan por primera vez a partir de los 21 días después de la eclosión (dde) en el intestino, a los 27 dde en el riñón cefálico, a los 34 dde en la branquia y a los 62 dde en el bazo y en el timo. Así mismo, analizamos la expresión de genes marcadores de la inmunidad innata y de la inmunidad adaptativa con el fin de correlacionar el desarrollo de los órganos linfomieloides y la aparición de las diferentes células del sistema inmunitario. La mayoría de los transcritos de los genes de la inmunidad innata analizados se detectan a partir del día 1 dde y la mayoría de los transcritos de los genes de la inmunidad adaptativa analizados se detectan a partir de los 21 dde. Por tanto, el patrón de expresión génica obtenido sugiere que la inmunocompetencia de las larvas de dorada depende de la inmunidad innata. Por último, la vacunación frente a P. damselae subsp. piscicida durante el desarrollo larvario de dorada es ineficaz y, de hecho, aumenta la susceptibilidad de las larvas a una infección. Además, no existe correlación alguna entre la formación de los órganos linfomieloides y la detección de los marcadores de la inmunidad adaptativa con la adquisición de la inmunocompetencia.