Identificación y caracterización funcional de proteínas antioxidantes en el extracto excretor-secretor de fasciola hepática

Abstract

Mediante el uso de sueros de conejos inmunizados con el extracto excretor-secretor de Fasciola hepatica se identificaron varios genes de una genoteca construida en el fago gt11. Estos cDNAs fueron caracterizados por determinación de su secuencia de nucleótidos y la búsqueda en Bancos de datos de secuencias homólogas. Las regiones de los cDNAs codificadoras de proteínas fueron clonadas en los vectores de expresión de Escherichia coli apropiados para producir las proteínas en cantidad suficiente sin tener necesidad de purificarla del parásito. Estas proteínas heterólogas fueron empleadas para producir anticuerpos en conejos y así identificar a las proteinas nativas en el extracto excretor-secretor. Las proteínas producidas fueron caracterizadas encontrándose tanto por homología como por ensayos funcionales que en su mayoría son antioxidantes perteneciendo a un sistema de defensa del parásito contra los productos ROS (especies reactivas de oxígeno) generados por la respuesta inmune del hospedador. Se han caracterizado las siguentes proteínas: una tiorredoxina peroxidasa(TPx) perteneciente a un grupo de peroxirredoxinas con propiedades antioxidantes; una tiorredoxina(TRX) que además de ser antioxidante es quizás la donadora de los electrones necesarios para la reducción de la TPx haciéndola así activa y una proteína disulfuro isomerasa(PDI) que además de facilitar el plegamiento de proteínas mediante el establecimiento de enlaces disulfuro actúa como donador de electrones, actuando así también como antioxidante. A diferencia de otras TPx descritas, la de F. Hepatica no es específica a grupos tioles, sino que también protege de la inactivación usando ascorbato, lo cual sugiere diferencias funcionales.