Bases para la manipulación genética del patógeno de peces flavobacterium psychrophilum

Resumo

El patógeno de salmónidos Flavobacterium psychrophilum es el causante de la enfermedad del agua fría. Esta patología causa importantes pérdidas económicas en las piscifactorías, y no se dispone de un sistema de profilaxis eficaz. A pesar de la gran importancia de esta enfermedad, se conoce muy poco sobre los mecanismos de patogenicidad de F. psychrophilum. En el presente trabajo se ha diseñado un nuevo medio de cultivo sólido para mejorar la recuperación de células viables a partir del cultivo líquido, y se han desarrollado una serie de métodos como la conjugación, transformación y vectores de expresión, que permiten la manipulación genética de F. psychrophilum. Aplicando la tecnología desarrollada se han obtenido una serie de mutantes en caracteres descritos como implicados en la virulencia de F. psychrophilum (motilidad, actividad proteolítica extracelular y limitación de crecimiento en ausencia de hierro). De entre estos mutantes, en la presente memoria se estudió el denominado FP523, que presentó simultáneamente defectos en los tres rasgos fenotípicos anteriormente señalados y una disminución en su virulencia. Además, este mutante mostró también alteraciones en el crecimiento y un aumento a la sensibilidad al DTT y, al contrario que la cepa parental, fue capaz de formar biofilm. El gen interrumpido en este mutante, denominado tlpB, codificaba una tioldisulfuro oxidorreductasa implicada en la reducción de puentes disulfuro en las proteínas periplásmicas.