IC-TaggingPlataforma universal para la producción de microesferas proteicas para aplicaciones biotecnológicas

Resumo

El sistema IC-Tagging es una metodología patentada desarrollada en nuestro laboratorio que se basa en el etiquetado molecular de proteínas con un dominio denominado IC que provoca su relocalización a microesferas (MS) formadas por la proteína muNS-Mi. Gracias al sistema de expresión de baculovirus y células de insecto podemos obtener gran cantidad de MS cargadas con proteínas de interés. Esta metodología presenta múltiples aplicaciones biotecnológicas entre las que destaca la utilización de este material particulado para el desarrollo de vacunas subunitarias. En este trabajo se ha estudiado y evolucionado el sistema IC-Tagging como plataforma biotecnológica para diferentes propósitos. En primer lugar pensamos en crear un sensor para la retrotranslocación de proteínas del retículo endoplásmico (ER). Para probar si esto era posible decidimos comprobar si la proteína EGFP fragmentada era capaz de reconstituir su fluorescencia acercando ambos fragmentos utilizando nuestro sistema. Probamos varias estrategias diferentes encontrándonos que el reensamblaje sucede, pero no es muy eficiente. A continuación pensamos en la posibilidad de crear vacunas subunitarias contra virus envueltos. Este tipo de virus presentan glicoproteínas víricas que, tras pasar por el sistema secretor de la célula, acaban formando parte de su envoltura lipídica. Para desarrollar vacunas contra este tipo de virus pensamos en adaptar el sistema IC-tagging de forma que podamos formar microesferas y cargarlas de glicoproteínas en el interior del ER. Para lograrlo tuvimos que mutar un sitio de glicosilación en muNS-Mi que impedía la formación de MS. Posteriormente comprobamos que las MS podían cargarse con glicoproteínas y que los patrones de glicosilación no se veían alterados significativamente por su inclusión en MS. Por último decidimos probar nuestro sistema en un sistema de expresión procariota para comprobar su universalidad, esto es, si funciona en cualquier tipo de célula. Además de comprobar que en bacterias el sistema funcionaba exactamente igual que en células eucariotas, comprobamos que con esta variante podíamos expresar algunas proteínas que éramos incapaces de expresar con ningún otro sistema. Así, pudimos expresar la proteína Gc del virus RVFV que no existen datos de su expresión citosólica y la proteína glucosa-6-fosfatasa-2 (IGRP) que, a pesar de su enorme interés farmacéutico, tampoco existen datos en la bibliografía de su expresión y purificación.