Análisis genético molecular de la retinitis pigmentaria en dos familias que presentan diferentes modos de herencia mendeliana

Abstract

La Retinitis Pigmentaria es una patología hereditaria degenerativa de la retina que causa la muerte de las células fotorreceptoras por apoptosis. La prevalencia mundial de esta patología se sitúa en tomo a 1:4000 individuos y está considerada una de las principales causas de ceguera en el mundo desarrollado. La gran heterogeneidad genética que presenta implica varias formas de herencia que se engloban en dos grandes categorías: mendeliana y no mendeliana. Los objetivos de esta Tesis Doctoral han sido identificar los genes responsables de la Retinitis Pigmentaria en dos familias con diferentes modos de herencia mendeliana -una de ellas con una forma ligada al cromosoma X y la otra con una forma autosómíca recesiva- y evaluar la utilización de tecnología de genotipado high-throughtput en el diagnóstico genético de dicha patología. Como paso previo a la búsqueda de los genes responsables de Retinitis Pigmentaria en ambas familias se ha realizado la exclusión de los genes y lod causales conocidos, bien mediante análisis de cosegregadón y ligamiento empleando marcadores STRs (Short Tándem Repeat) y SNPs (Single Nudeotide Potymorphism), bien mediante el uso de un array de genes de formas recesivas de la Retinitis Pigmentaria y Amaurosis Congénrta de Leber. Tras ello, se procedió a la secuenciación de los exones y las regiones frontera exón-intrón de los genes que no pudieron ser exduidos con el fin de identificar las posibles variantes de secuencia patogénicas. El análisis genético molecular realizado sobre la familia afectada por una forma de Retinitis Pigmentaria ligada al cromosoma X no ha logrado determinar con absoluta certeza el gen responsable. El escrutinioide la práctica totalidad del cromosoma X con 82 STRs y 33 SNPs, el cribado de 22 genes asodados a RP autosómíca recesiva y la realización de un análisis de ligamiento de todo el genoma con 262264 marcadores SNPs, no han permitido acotar de manera consistente una región cromosómica que pudiese ser designada como candidata. Sin embargo, la utilizadón del array de genes en la familia con herencia autosómíca recesiva señaló a MERTK como posible gen responsable. El análisis mutadonal de este gen reveló la presentía de una mutadón no descrita hasta el momento. Esta variante de secuenda patogénica afecta al sitio donante de splidng del intrón 16 causando el skipping del exón 16 en el mRNA. Como consecuencia, se genera un cambio de pauta de lectura que introduce un codón de parada prematuro en el exón 17 dando lugar a un transcrito de mRNA alterado. Por todo lo anterior, se ha podido comprobar que las técnicas de genotipado resultan una herramienta esendal para el diagnóstico molecular de una patología con una heterogeneidad genética tan elevada como la mostrada por la Retinitis Pigmentaria.