Mecanismo de acción de p16Ink4a en células D3T3Rb -/-

Zusammenfassung

La mayoría de los tumores humanos Tb-/- expresan p16+/+; a pesar de ello, las células no detienen el ciclo sino que proliferan, a diferencia de lo que ocurre en células Rb+/+. En esta tesis se utiliza un modelo de células de ratón carentes del gen Rb en las que se sobreexpresa p16Ink4a, utilizando el método de infección retroviral. Se analiza el mecanismo de acción de ese inhibidor y se verifica que actúa de forma semejante a como lo hace en células Rb+/+ en dos aspectos: A,- Se une e inactiva complejos ciclina D/cdk4. B,- Redistribuye p27Kip1 hacia complejos ciclina E/cdk2 disminuyendo la actividad del mismo. Además, frente a lo que hasta ahora se había establecido para células Rb-/- el ciclo celular de este modelo se ve afectado por la sobreexpresión de p16Ink4a, mostrando una fase G1 prolongada cuando las células entran en el ciclo desde G0. Respecto a los cambios moleculares observados se encuentra que: A,- Hay una regulación negativa del gen y la proteína de ciclina A durante la transición G1/S en células que provienen de fase G0. B,- Falta una forma de fosforilación de la proteína p130. C,- Se regulan positivamente los niveles proteicos de p27Kip1 en células en G0. Los niveles finales de este último inhibidor, p27kip1, son resultados de una menor transcripción y una mayor traducción del mismo, mediada esta última a través de la región 3'UTR de su ARNm. Se demuestra que los efectos sobre el ciclo y sobre ciclina A son dependientes de los mayores niveles de p27Kip1 durante G0.