Proliferación y apoptosis en hepatocitos en cultivo, protimosina alfa y gliceraldehído 3 fosfato deshidrogenasa

Resumo

El estudio de los procesos de proliferación y apoptosis en el hígado es de gran importancia debido a que su desregulación genera un amplio número de enfermedades hepáticas. En este trabajo de tesis es estudió la participación de dos proteínas (protimosina alfa, PTA y gliceraldehído 3 fosfato deshidrogenasa, GAPDH) en los procesos de proliferación y apoptosis hepática. El mayor conocimiento acerca de la participación de estas proteínas en estos proceso, permitirán desde la investigación básica aportar en el entendimiento de las patologías del hígado y contribuir a la prevención, el diagnóstico o tratamiento de las mismas. Para esto, y en primer lugar, se establecieron los sistemas de hepatocios primarios y de línea celular en cultivo, se indujeron a proliferar con HGF, se determinaron las condiciones óptimas de esta inducción, y se pusieron a punto métodos de determinación de la proliferación celular. Por otro lado, se indujo la apoptosis de los hepatocios con dos agentes (TGF-beta1 y cicloheximida), se determinaron las condiciones óptimas de esta inducción, y se pusieron a punto las metodologías de determinación de apoptosis. Se estudiaron los niveles de RNA menajero de la PTA (por Northern Blot) en la quiescencia, la apoptosis y la proliferación celular, determinándose que existe un aumento de la expresión de esta proteína en la proliferación y una disminución en la apoptosis. Para la GAPDH se estudió su expresión a nivel de proteína en extractos proteicos nucleares y citoplasmáticos, mediante la técnica de Western Blot. La expresión del GAPDH resultó aumentada en los núcleos apoptóticos y en los citoplasmas proliferantes y apoptóticos. Para estudiar la localización de estas proteínas en los distintos estados celulares (quiescencia, proliferación y apoptosis) se realizó una inmunocitoquímica que se observó al microscopio confocal. Mediante esta técnica se localizó a la PTA en l