"Marteilia", parásito de "Mytilus galloprovincialis"transmisión experimental, caracterización molecular y nuevos sistemas de diagnóstico

Resumo

Marteilia refringens es un parásito protozoo perteneciente al Filum Paramyxea. Recientemente, ha sido incluido por la Unión Europea dentro de la lista de parásitos de declaración obligatoria. Hasta el momento, se desconoce si la especie de Marteilia que afecta al mejillón, Mytilus galloprovincialis cultivado en Galicia se trata o no de M. refringens, sin haberse detectado en este parásito mortalidades masivas como las ocurridas en la ostra plana Ostrea edulis, cultivada en Europa. Dada la importancia que tiene el cultivo del mejillón en Galicia cualquier agente que pueda afectar a esta producción debe ser objeto de estudio, por ello el objetivo de esta tesis se ha centrado en el estudio del parásito Marteilia detectado en el mejillón M. galloprovincialis. Para ello se ha analizado bajo tres puntos de vista: En primer lugar se diseñaron dos experimentos de cohabitación entre diferentes especies de moluscos para analizar el papel del mejillón gallego en la transmisión de la Marteiliasis. Dichos experimentos resultaron negativos, concluyendo al igual que otros autores, en la existencia de un huésped intermediario. Para intentar esclarecer cuál es la especie que afecta al mejillón gallego se emplearon técnicas de biología molecular. Tras la amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del ADN del parásito con primers universales derivados de la región de ARN ribosómico 18S no se obtuvieron resultados positivos. Por el contrario, el uso de primers específicos para el parásito resultaron amplificar de forma sensible y especifica el ADN de Marteilia. El ADN de Marteilia refringens, aislada de Ostrea edulis y ADN de Marteilia aislado de M. galloprovincialis se amplificaron con estos primers específicos y su secuencia de nucleótidos se comparó. Dichas secuencias mostraron diferencias en 7 nucleótidos lo cual apoya la hipótesis de que se tratan de dos especies distintas. Un buen sistemas de diagnóstico es una es una herramienta muy útil en el control de una enfermedad. Se han diseñado nuevos sistemas para le detección de este parásito mediante técnicas de inmunología (inmunofluorescencia, inmunoperoxidasa, inmunodot y ELISA), y de biología molecular (PCR, hibridación con una sonda no radioactiva aplicada a dot blot e hibridación in situ). Tras la puesta a punto de estas técnicas en la detección de células de Marteilia purificada, se hizo una comparación de las técnicas clásicas, aposiciones y cortes histológicos, técnicas inmunológicas y de biología molecular en la detección del parásito en muestras de mejillón, resultando la técnica de PCR la más sensible.