Estudio de la función biológica de la protimosina alfaconstrucción y análisis de clones celulares con expresión disminuída de la protimosina alfa

Resumo

La protimosina Alfa es una proteína nuclear, de pequeño tamaño y fuertemente ácida. No se conoce su función biológica, aunque se dispone de pruebas indirectas que la ligan a la proliferación celular. Este trabajo demostrará una relación directa y de dependencia entre la proliferación celular y la protimosina Alfa . Para ello, y en primer lugar, hemos construido un nuevo plásmido de expresión regulable eucariota, el PBA. En este plásmido se ha clonado en dirección antisentido el cana de la protimosina Alfa y hemos transfectado fibroblastos de ratón NIH/3T3 con dicho plásmido. Los clones transfectados seleccionados se mostraron resistentes al antibiótico G418 , habían integrado el vector (comprobado por northern y southern blot) y la expresión del cdna antisentido de la protimosina Alfa era regulable por Cd y Zn. Una vez obtenidos estos clones, se realizaron experimentos de proliferación en presencia y ausencia de Zn (es decir, en presencia o ausencia de protimosina Alfa ), encontrándose que la protimosina Alfa es indispensable para la proliferación celular, así como para el paso de G0 a G1 en el ciclo celular. Asimismo, las células defectivas de protimosina Alfa mostraron cambios morfológicos, por lo que su función está ligada a este parámetro.