Regulación de síntesis de enzimas pécticas en "Fusarium oxysporum" f. sp. "radicis lycopersici"Purificación y caracterización de pectín y pectato liasas

Resumo

En esta tesis se han estudiado las enzimas pecticas de fusarium oxysporum f.sp. Radicis-lycopersici (forl). Inicialmente se analizo la síntesis de distintas polisacaridasas (poligalacturonasa, pectin liasa, beta-1,4-glucanasa, avicelasa y beta-glucosidasa), para a continuación centrarse en las condiciones optimas de cultivo para la producción de las enzimas pecticas y caracterizacion de las mismas. La regulacion de las enzimas pecticas de forl (pectin liasa, pectato liasa y poligalacturonasa) se ha estudiado valorando las actividades enzimáticas, los patrones de expresion genica mediante traducciones in vitro y posteriores electroforesis y con la utilización de sondas especificas. Se ha demostrado una induccion por acido galacturonico y represion catabolica por glucosa. A diferencia de los resultados de otros autores no se ha detectado mayor produccion de liasas en los cultivos a ph 8,0. Se han detectado tres formas con actividad liasa, con pis de 9,20, 9,00 y 8,65, y cuatro con actividad poligalacturonasa, la principal con pi 7,35, dos con pis 6,85 y 6,55, y una minoritaria con pi 9,30. Las tres liasas actúan sobre pectina y pectato en condiciones alcalinas y tienen un absoluto requerimiento de calcio. La mas alcalina tiene preferencia por pectina, mientras que las otras dos por pectato. Las poligalacturonasas son mas activas a ph acido y son inhibidas por calcio. La pectin liasa tiene un comportamiento de tipo "endo" mientras que las pectato liasa y poligalacturonasa tienen un comportamiento de tipo "exo". Por ultimo se han purificado y caracterizado las tres liasas demostrándose un efecto sinergistico entre las dos pectato liasas. La adición de una fracción rica en pectin metilesterasa aumento la actividad de las tres liasas en presencia de pectina, lo que parece indicar que la desmetilacion de la pectina favorece la acción de las liasas